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熒光偏振的應用

日期:2022-07-20 12:35
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摘要:

                             熒光偏振的應用


   光偏振應用的領域很多,就先舉2個例子吧.
   熒光偏振**技術(Fluorescence Polarization Immunassay——這是一項相對較為成熟的技術。它利用熒光偏振原理,采用競爭結合法機制,常用來監測小分子物質如**、**在樣本中的含量。以**檢測為例,以熒光素標記的**和含待測**的樣本為抗原,與一定量的抗體進行競爭性結合。熒光標記的**在環境中旋轉時,偏振熒光的強度與其受激發時分子轉動的速度成反比。大分子物質旋轉慢,發出的偏振熒光強;小分子物質旋轉快,其偏振熒光弱(去偏振現象)。因此,在競爭性結合過程中,樣本中待測**越多,與抗體結合的標志抗原就越少,抗原抗體復合物體積越大,旋轉速率越慢,從而激發的熒光偏振光度也就越少。當我們知道了已知濃度的標記抗原與熒光偏振光性的關系后就可以測量未知濃度的物質。因此,這項技術可用來檢測環境或食品樣品中有毒物質如農藥的殘留量。
  此外,臨床醫學診斷也在廣泛采用熒光偏振。除應用上述方法可測定人體體液樣本中某一特定物質的含量外,也可直接應用于臨床診斷。例如,由Cercek等開發的惡性腫瘤診斷方法中提出,進入**細胞的熒光物質,受胞漿濃度有序性的干擾,其運動方向和速率會發生變化。胞漿粘度高時,熒光物質運動變慢,受偏振光激發產生的激發光與胞漿粘度低時產生的激發光性質不同。通過追蹤測定激發的偏振光性質,即可了解**細胞的胞漿流動性、粘度等環境的變化,結合其它輔助診斷方法,可有助于癌癥的早期診斷。利用熒光偏振,還可檢測病人樣本中病毒DNAHBV、HPV的復制量,為臨床診斷提供有力的量化指標依據。
     SNPs篩選
  SNPs是指人類基因組中普遍存在的個體之間相互區別的堿基變化位點,稱作單核苷酸多態性(Single nucleotide polymorphisms)。人們普遍認為,SNPs是人類個體之間相互區別的原因,也和多種**發生、變化相聯系。長期以來,SNPs位點的快速篩選需要大量的基因分型工作,花費巨大,是工作進展的*大障礙?,F在,研究者可以采用熒光偏振為基礎的FP-TDI技術(fluorescence polarization template-directed dye-terminator incorporation)進行高通量單核苷酸多態分型,操作簡單,投入少。
  實驗過程中先通過PCR獲得含有SNP位點的一條擴增產物,針對這條含有SNP興趣位點的序列設計一條寡核苷酸探針,在DNA聚合酶和熒光標記的ddNTP存在下,探針單堿基延伸。特定的ddNTP將結合到靶序列的SNP位點,并造成延伸反應的終止。自由的標記有熒光的ddNTP比結合到靶序列的ddNTP體積小,在液體環境中旋轉速度快,激發的偏振光的偏振值也小,而后者當ddNTP加到序列上后,有效分子體積變大,受偏振光激發后發出的偏振值高。因此,熒光偏振現象可以應用在鑒別ddNTP的結合位點和基因分型。
    

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